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 高通量测序   


         

   原理:新一代测序的技术原理是采用可逆性末端边合成边测序反应,首先在 DNA片段两端加上序列已知的通用接头构建文库,文库加载到测序芯片F1owcell上,文库两端的已知序列与F1owcell基底上的oligo序列互补,每条文库片段都经过桥式PCR扩增形成一个簇,测序时采用边合成边测序反应, 即在碱基延伸过程中,每个循环反应只能延伸一个正确互补的碱基,根据四种不同的荧光信号确认碱基种类,保证最终的核酸序列质量,经过多个循环后,完整读取核酸序列。
 

   仪器:Illumina NextSeq500高通量测序平台,不仅具有高通量测序能力和台式测序仪即载即开(load-and-go)的简便性,而且是唯一一个在人类全基因组测序中可一次性高覆盖运行的 NGS系统。




 Sanger测序法   


 

   原理:Sanger测序法的技术原理是在DNA聚合酶的作用下,将dNTP/ddNTP的混合物加到特异性引物的末端。产生长短不等的寡核苷酸链,并带有与四种碱基对应荧光标记。当带有荧光标记的寡核苷酸链混合物通过测序仪毛细管进行电泳分离时,就能根据荧光颜色判断对应碱基,而根据荧光信号出现的先后顺序,判断对应碱基在序列中所处的位置。

   仪器:ABI 3500基因分析仪为支持验证和法规规范环境中对仪器性能的严格要求而设计,同时保留了生命科学研究人员心目中Applied Biosystems产品一贯拥有的无可匹敌的应用多功能性。





 荧光定量PCR   


 

   原理:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链解离成单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②复性:模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需1~2分钟, 1~2小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
 

   仪器:Roche LightCycler® 480实时荧光定量PCR系统可以让你实现实时在线的高通量快速荧光定量PCR循环,可同时检测96或384孔板样品。结果可以通过PCR循环过程中实时荧光采集和软件分析进行定量和基因型的分析。复杂的光学检测系统可以进行多重PCR检测,并适用于多种检测模式。超过10年的实时定量PCR系统与试剂研发的丰富经验,凝聚成今日业界的巅峰之作。




 荧光原位杂交FISH   


 

   原理:FISH的基本原理是用已知的标记单链核酸为探针,按照碱基互补的原则,与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合,形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列,因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。与传统的放射性标记原位杂交相比,荧光原位杂交具有快速、检测信号强、杂交特异性高和可以多重染色等特点。
 

   仪器:Leica DM 2500荧光显微镜捕获并结合多通道荧光图像,可产生完美的FISH图像,以实现文档处理和审查;强大的分析软件可反转对比染色和叠加探测来精确地定位荧光信号,以保证结果的准确性。


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